固定化酵素カラムを用いた胆汁酸の一斉分析

Introduction

胆汁酸はそのステロイド骨格の3α位に共通して水酸基を有しており、補酵素であるNAD（Nicotinamide AdenineDinucleotide）の存在下、この水酸基を選択的に酸化する酵素として3α-HSD（3α-Hydroxysteroid Dehydrogenase）が知られています。この酵素反応では、胆汁酸1分子が3-ケトステロイドへ酸化されたときに、NADの還元型であるNADH 1分子が生成し、このNADHは強い蛍光（Ex=340nm, Em=470nm）を有します。そこで、分離カラムからの溶出液にNADを含む反応液を連続的に混合し、この混合液を3α-HSDを固定化した酵素カラムを通過した時に、生成するNADHを検出するポストカラム誘導体化システムで、胆汁酸の標準試料を測定した結果を報告します。

Keywords