自動プレカラムOPA・FMOC誘導体化法によるアミノ酸分析

• OPA・FMOC誘導体化により、第一級アミノ酸および第二級アミノ酸の一斉分析が可能です。
• オートサンプラーのユーザープログラム機能を用いて、プレカラム誘導体化操作を自動化できます。
• HPLC条件下で、プロリンを含むアミノ酸22成分を1サイクル70分で分析可能です。

アミノ酸の分析方法の1つであるプレカラム誘導体化法は、アミノ酸試料をあらかじめ誘導体化した後、C18 カラムなどを用いて分離・検出する方法です。誘導体化試薬として広く用いられている o-フタルアルデヒド(OPA) は第一級アミンを有するアミノ酸（以下、第一級アミノ酸）と反応する蛍光誘導体化試薬として知られていますが、プロリンのような第二級アミンを有するアミノ酸（以下、第二級アミノ酸）とは反応しないという欠点があります。しかし、プロリンもタンパク質を構成する重要なアミノ酸であり、食品や飲料などに含まれることも多いため、他のアミノ酸とプロリンを併せた一斉分析が求められる場合があります。これに対応する手法として、OPA およびクロロぎ酸 9-フルオレニルメチル(FMOC-Cl) を併用した分析法があります。この手法では、第一級アミノ酸を OPA と反応させ誘導体化した後、OPA と反応しない第二級アミノ酸を FMOC-Cl で誘導体化し、それぞれの誘導体を蛍光検出します。これらの蛍光誘導体は、励起および蛍光波長が異なりますが、検出波長を自動で切り替えることで一斉分析が可能です。また、オートサンプラーのユーザープログラム機能を用いることで、各試薬の分注、混合および反応時間の管理を含む誘導体化操作を自動化できます。

今回は、OPA および FMOC-Cl で誘導体化したプロリンを含むアミノ酸 22 成分を、汎用的な C18 カラムである Unifinepak C18 を用い、HPLC により 1 サイクル 70 分の測定を行いましたので、その結果を報告します。

アミノ酸、蛍光検出、プレカラム誘導体化、OPA、FMOC、Unifinepak C18

430038H

2026年