グリホサート・アミノメチルリン酸 (AMPA) 分析システム
別添方法12 誘導体化-高速液体クロマトグラフ法
試料は FMOC-Cl で誘導体化したのち、蛍光検出器で検出します。検出波長は、高感度な結果が得られる Ex/Em: 270/315 nm を採用します。系の洗浄のために、低圧グラジエントユニットを使用します。
システム図
1: Glyphosate (0.005 mg/L), 2: AMPA (0.005 mg/L)
注入量: 10 µL
注入量: 10 µL
構成（EXTREMA 4000Model）
| 移動相送液ポンプ | PU-4180 | × 1 |
|---|---|---|
| オプション | DG unit | × 1 |
| LG unit | × 1 | |
| オートサンプラー | AS-4050 | × 1 |
| オプション | TC-4000-1 | × 1 |
| カラムオーブン | CO-4060 | × 1 |
| 蛍光検出器 | FP-4025 | × 1 |
| ボトルスタンド | BS-4000-1 | × 1 |
| A/Dインターフェース | LC-Net Ⅱ/ ADC | × 1 |
|---|---|---|
| LC-Net ケーブル | LC-NetCG | × 3 |
| 装置制御・ データ解析ソフト |
ChromNAV Ver.2*1 | × 1 |
| 分離カラム | Develosil ODS-HG-5 (4.6 mmI.D. x 150 mmL, 5 µm) |
× 1 |
| 配管等 | HPLC スタートアップキット | × 1 |
| オートサンプラー バイアル |
スクリューバイアル2mLクリアー | × 1 |
| セプタム付キャップ | × 1 |
*1 装置制御・データ処理用PC一式が別途必要です。
測定条件
| カラム | Develosil ODS-HG-5 (4.6 mmI.D. x 150 mmL, 5µm) |
|---|---|
| 移動相 | A: 0.05M リン酸塩緩衝液(pH 2.5 / アセトニトリル (76/24) B: 0.05M リン酸塩緩衝液(pH 2.5 / アセトニトリル (25/75) A/B: 100/0 (0 - 15 min) → 0/100 (15.1 - 30 min) → 100/0 (30.1-45 min) |
| 移動相 流量 | 1.0 mL/min(A/B:100/0) 1.5 mL/min(A/B:0/100) |
|---|---|
| カラム温度 | 40°C |
| 波長 | Ex: 270 nm, Em: 315 nm Gain x100 |
| 注入量 | 10 µL |
〇0.05M リン酸塩緩衝液
KH2PO4 6.8 g を精製水で 1 L にメスアップ→リン酸 約 1.5 mL を添加し、pH 2.5 に調整
〇50 mM ホウ酸塩緩衝液※
ホウ酸 0.3 g に精製水を約 70 mL 加え、10% w/v NaOH 水溶液で pH を 9.5 に調整したものを、精製水で 100 mL にメスアップ
〇0.1％ FMOC-Cl 溶液
クロロギ酸 9-フルオレニルメチル10 mg をアセトンで10 mL にメスアップ※1/10スケールで調製しています
〇標準原液
グリホサート及び AMPA 各10 mg を別々のメスフラスコに採り、精製水で 100 mL にメスアップ (100 mg/L)→冷蔵保存
〇混合標準液
各標準原液 1 mL を精製水で100 mL にメスアップし、さらにこの溶液を精製水で 10 倍希釈 (0.1 mg/L)→都度調製
前処理
別添方法15 高速液体クロマトグラフ-ポストカラムによる一斉分析法
試料中のグリホサート及び AMPA は、陰イオン交換カラムで分離したのち、OPA によってポストカラム誘導体化し、蛍光検出します。
システム図
1: AMPA (0.1 mg/L), 2: Glyphosate (0.1 mg/L),
注入量: 100 µL
注入量: 100 µL
構成（EXTREMA 4000Model）
| 移動相送液ポンプ | PU-4180 | × 1 |
|---|---|---|
| オプション | DG unit | × 1 |
| 反応液送液ポンプ | PU-4185 | × 1 |
| R-PU-4185 | × 1 | |
| オートサンプラー | AS-4050 | × 1 |
| オプション | TC-4000-1 | × 1 |
| カラムオーブン | CO-4060 | × 1 |
| 蛍光検出器 | FP-4025 | × 1 |
| ボトルスタンド | BS-4000-1 | × 1 |
| A/Dインターフェース | LC-Net Ⅱ/ ADC | × 1 |
|---|---|---|
| LC-Net ケーブル | LC-NetCG | × 4 |
| 装置制御・ データ解析ソフト |
ChromNAV Ver.2*1 | × 1 |
| 分離カラム | Shodex IEC QA-825 (8.0 mmI.D. x 75 mmL) |
× 1 |
| 配管等 | 反応キット | × 1 |
| オートサンプラー バイアル |
スクリューバイアル2mLクリアー | × 1 |
| セプタム付キャップ | × 1 |
*1 装置制御・データ処理用PC一式が別途必要です。
測定条件
| カラム | Shodex IEC QA-825(8.0 mmI.D. x 75 mmL) |
|---|---|
| 移動相 | リン酸塩緩衝液 (pH 6.6) |
| 反応液１ | 次亜塩素酸ナトリウム溶液 |
| 反応液２ | OPA 溶液 |
| 移動相 流量 | 1.0 mL/min |
|---|---|
| 反応液１ 流量 | 0.4 mL/min |
| 反応液２ 流量 | 0.5 mL/min |
| カラム温度 | 50°C |
| 波長 | Ex: 339 nm, Em: 455 nm Gain x100 |
| 注入量 | 100 µL |
〇o-フタルアルデヒド (OPA) 溶液
OPA 0.2 g をメタノール 2.5 mL に溶解し、0.05 M 四ホウ酸ナトリウム溶液で250 mL とし、脱気後2-メルカプトエタノール 0.5 mL を添加→都度調製
〇次亜塩素酸ナトリウム溶液
NaOH 0.4 gをビーカーに採り、精製水約 800 mL を加える→KH2PO4 1.4 g, NaCl 11.6 g 及び NaClO (5%) 0.2 mL を加える→精製水で1L にメスアップ
〇リン酸塩緩衝液pH6.6
KH2PO4 4.0 g 及びNa2HPO4・12H2O 6.0 g をメスフラスコに採り、精製水で 1000 mL にメスアップ
〇標準原液
グリホサート及び AMPA 各10 mg を別々のメスフラスコに採り、精製水で 100 mL にメスアップ (100 mg/L)→冷蔵保存
〇標準液
各標準原液 1 mL を精製水で 100 mL にメスアップし、さらにこの溶液を精製水で 10 倍希釈 (0.1 mg/L)→都度調製
前処理
なし
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