HPLCの基礎（5）クロマトグラムの定性・定量

定性分析

たいていの場合は標準試料における各成分の保持時間と、未知試料のクロマトグラムの保持時間を比較することで同定を行います。多くのピークが出現する複雑なクロマトグラムが得られる場合や、分析目的成分の保持時間が標準試料と実試料とで異なる場合は、未知試料に標準試料を加えることで、目的成分の同定を行います。確かな定性を行う場合は、スペクトルを取得することや、分取した成分をIR、MSなどで分析することで可能となります。

図1 保持時間を比較する同定方法

定量分析

定量には、外部標準法と内部標準法があり、どちらも検量線を用いて行います。外部標準法は、標準試料で検量線を作成し、未知試料を定量する方法です。内部標準法は、標準試料で検量線を作成する際に内部標準物質を一定量添加し、濃度比vsピーク面積比で検量線を作成し、定量を行う方法です。
内部標準物質としては、実試料中に含まれていない成分で、夾雑成分のピークと完全分離でき、定量目的成分に近い位置で溶出し、化学的、物理的に安定で高純度な成分であることが必要です。
内部標準法のメリットとしては、注入量や溶解溶媒の揮発による誤差を防ぐことができます。