分光蛍光光度計の基礎（3） 分光蛍光光度計の応用例

分光蛍光光度計の応用例を紹介します。

蛍光異方性は、蛍光分子が励起されてから蛍光を発するまでの間に、その分子がどの程度運動したかという情報を反映します。そのため蛍光異方性を測定することで、タンパク質や核酸など生体高分子の結合状態や立体構造の変化を観測することができます。蛍光異方性の測定をイムノアッセイやバインディングアッセイ等に適用することで、レセプター・リガンド の相互作用や結合特異性などに関する知見を得ることができます。

一般に、蛍光は試料が吸収した光(励起光)よりもエネルギーの低い長波長側に現れます。 しかし、アップコンバージョン蛍光体の場合、多段階励起により励起光よりもエネルギーの高い短波長側に蛍光が現れます。この技術は、近赤外光を可視光に変換することが可能なため、太陽電池の発電効率を向上させることができる技術として期待されています。

軽油引取税のかからない灯油や重油を、軽油に代用したり混ぜたりするといった「不正軽油」を使った脱税行為や環境汚染を防止するため、灯油やA重油には識別剤として 1 ppm のクマリンが添加されています。この識別剤を定量する分析法が石油学会規格（JPI-5S-71-2010）で標準化されています。クマリンはアルカリ溶液中で加水分解されシス-o-ヒドロキシケイヒ酸となり、さらにこれに紫外線を照射すると異性化してトランス-o-ヒドロキシケイヒ酸に変わります（図5）。このトランス-o-ヒドロキシケイヒ酸は緑色の蛍光（Ex: 360 nm、Em: 500 nm）を発します。本定量法では、この蛍光を検出します。濃度 0、0.1、0.4、0.8、1.2 ppm に調製したクマリン溶液試料を測定し、検量線を作成したデータを図6、図7に示します。